Hoy preparamos a las células LM3 para poder inocular.
Para esto realizamos los siguientes pasos:
1. Miramos a las células Lm3 por el microscopio (estas crecen en monocapa)
2. Lavamos dos veces con PBS para sacar el medio (que tiene células muertas y desperdicios)
3. Agregamos tripsina que tiene una enzima peptidasa (rompe la monocapa separando a las células LM3)
4.Se lleva a la estufa por 5´a 37ºC para que las enzimas se activen.
5. Mirar las LM3 por el microscopio, si no están separadas, golpear las paredes del envase suavemente.
6. Colocarlas en el medio MEM (2 % glutamina, 1% penincilina y estreptomisina, o.5 %gentamisina)
7.Centrifugamos 8´a 16ºC a 82G.
8. Luego de centrifugar tiramos el sobrenadante y volvemos a llenar con medio MEM.
9. Volvemos a centrifugar.
10. Tirar el sobrenadante y agregar 1 ml de medio MEM; tomamos una alícuota y contar la cantidad de células (previamente teñidas con trip-blue) por el microscopio.
11. Inoculas a cada ratón con 200 microlitros de las células en medio MEM, de forma subcutánea.
