Continuamos con el protocolo para la purificacion de plasmidos. (solo para CD40)
Resuspendemos las bacterias con el buffer P1 (con RNAsa). Luego le aplicamos el buffers P2 y mezclamos cuidadosamente, esperamos 5 minutos y ponemos el siguiente buffer(P3). Lo dejamos reposar por 20 minutos en frio.
Después lo centrifugamos por 30 minutos a 4ºC. Removemos el sobrenadante y lo ponemos en un recipiente nuevo y centrifugamos por 15 minutos a la misma temperatura.
Mientras tanto limpiamos la columna con el buffer renew y la equilibramos con el buffer QBT. colocamos el sobrenadante en la columna y lo dejamos correr. Después de vaciarse la columna agregamos el buffer QC y por ultimo el buffer QF, este arrastra el plasmido por ende lo guardamos.
Para precipitar el DNA lo diluimos en isopropanol y centrifugamos. Dejamos decantar y lavamos el pellet con etanol 70%. Guardamos el DNA en el freezer para poder continuar en la próxima clase.
